ACE色譜柱是一種具有多模式分離能力的高效液相色譜(HPLC)工具,其核心優(yōu)勢在于通過特殊固定相設(shè)計(jì)和靈活的流動相調(diào)控,實(shí)現(xiàn)多種分離模式的切換。
1. 固定相設(shè)計(jì)
混合功能基團(tuán):
ACE色譜柱的固定相通常含有多種官能團(tuán),支持多種相互作用模式。
納米結(jié)構(gòu)調(diào)控:
通過表面修飾技術(shù)(如鍵合硅膠、聚合物涂覆)形成均勻的納米孔結(jié)構(gòu),增強(qiáng)傳質(zhì)效率,適應(yīng)不同分子大小的分離需求。
2. 流動相調(diào)控
溶劑極性調(diào)整:
通過改變流動相中水相與有機(jī)相的比例,調(diào)節(jié)分離機(jī)制。例如:
高有機(jī)相比例:以疏水作用為主(反相色譜模式);
低有機(jī)相比例:激活極性相互作用(正相或氫鍵色譜模式)。
pH與離子強(qiáng)度:
調(diào)整流動相的pH值或添加離子對試劑,可切換離子交換(IEC)或手性分離模式。
3. 溫度與梯度控制
溫度敏感性:
某些ACE柱對溫度變化敏感,可通過升溫或降溫改變固定相與溶質(zhì)的相互作用強(qiáng)度(如氫鍵色譜)。
梯度洗脫:
結(jié)合梯度洗脫技術(shù),在同一分析中實(shí)現(xiàn)多種分離模式的協(xié)同作用(如反相+離子交換聯(lián)用)。
二、ACE色譜柱支持的分離模式:
1. 反相色譜(RPC)
原理:基于疏水相互作用,非極性物質(zhì)先流出。
應(yīng)用場景:分離肽類、藥物小分子、天然產(chǎn)物等中等極性物質(zhì)。
典型條件:乙腈/水或甲醇/水梯度洗脫,pH 2~7。
2. 正相色譜(NPC)
原理:基于極性吸附作用,極性物質(zhì)先流出。
激活條件:使用低極性有機(jī)溶劑(如正己烷)與極性調(diào)節(jié)劑。
應(yīng)用場景:分離脂溶性成分(如脂肪酸、甾體)、手性化合物。
3. 氫鍵色譜(HILIC)
原理:依賴固定相表面的極性基團(tuán)(如酰胺、氰基)與溶質(zhì)形成氫鍵。
典型條件:高比例水相與極性調(diào)節(jié)劑。
應(yīng)用場景:極性代謝物、核苷酸、氨基酸分析。
4. 離子交換色譜(IEC)
原理:通過固定相上的離子交換位點(diǎn)(如磺酸基、季銨基)分離帶電離子。
激活條件:調(diào)整流動相pH至溶質(zhì)電離狀態(tài),或添加離子對試劑。
應(yīng)用場景:蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物大分子的電荷異構(gòu)體分離。
5. 手性色譜(Chiral HPLC)
原理:固定相含手性識別位點(diǎn)(如纖維素衍生物、環(huán)糊精),通過立體選擇性吸附分離對映體。
典型條件:正相或反相體系,搭配極性有機(jī)溶劑(如乙醇)或離子液體。
應(yīng)用場景:藥物分子(如布洛芬、沙利度胺)的對映體純度檢測。
